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10X转录组

2021-07-02 23:06:47

       随着测序技术尤其是高通量测序技术的迅速发展,人们对基因组变异 /基因表达差异与表型之间关系的认识越来越深刻。然而传统的Bulk RNA测序手段是针对细胞集合进行测序,而单个细胞特异性的信息往往被掩盖,导致错失很多重要信息。

        10X Genomics平台首先利用微流控技术分选单个细胞,然后将带有barcode和引物的凝胶珠以及单个细胞包裹在油滴中;在油滴中凝胶珠溶解释放反转录oligo,细胞裂解释放mRNA,通过mRNA 末端标签扩增(3’WTA)法获得用于测序的带barcode的cDNA;液体油层破坏后,cDNA进行后续文库构建,使用Illumina测序平台检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达数据,10min内自动完成多至80,000个细胞的捕获,细胞捕获率最高65%。可实现大量大细胞的快速高效标记、测序和分析,获得单细胞水平的基因表达谱和差异情况,并通过对复杂细胞群体进行深入细致分析,绘制大规模单细胞表达图谱。

标准信息分析

1.测序数据统计与 质控 :测序数据基本质控( reads数、测序饱和度等)、数据比对(细胞数目统计、reads基因组比对率等)、基因表达定量

2.细胞亚群分类与可视化:细胞过滤、细胞亚群分类、分类结果可视化(TSNE图)

3.亚群上调表达基因分析:上调表达基因筛选、GO/KEGG功能富集分析

4. Marker 基因筛选以及调控网络分析:标记基因筛选、各标记基因在群体中的表达分布、蛋白质互作网络分析

分析周期:

               30个自然日

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